2种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及比较 |
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引用本文: | 周忠涛,王小敏,汪伟,茅爱华,温立斌,倪艳秀,何孔旺. 2种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及比较[J]. 农业科学与技术, 2015, 0(1) |
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作者姓名: | 周忠涛 王小敏 汪伟 茅爱华 温立斌 倪艳秀 何孔旺 |
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作者单位: | 1. 江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京 210014; 南京农业大学动物医学院,江苏南京210095 2. 江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京 210014 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(31302071);公益性行业(农业)科研专项(201303046);江苏省自主创新项目(CX(14)2045);江苏省第四期"333高层次人才培养工程"(第二层次)资助项目(BRA2012194)。@@@@Supported by National Natural Science Foundation of China,Special Fund for Agro-scientific Research in the Public lnterest,Jiangsu Agricultural Science and Technology lnnovation Fund (CX,"333 High-level Personnel Training Project"of Jiangsu Province |
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摘 要: | [目的]实现在体外对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的定量检测。[方法]设计合成2组特异性引物和 TaqMan探针,构建分别包含 PCV2 ORF1和 ORF2基因全长的重组质粒作为标准品,经过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,建立2种检测PCV2的分别基于 PCV2 ORF1和 ORF2的TaqMan荧光定量PCR方法。[结果]所建立的2条标准曲线的 Ct值与模板拷贝数的对数之间具有良好的线性关系,相关系数 R均在0.99以上,扩增效率均在90%~110%;重复性好,组内变异系数均小于5%;特异性强,以猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为模板时均无扩增;敏感性高,ORF1方法可达1.0×101 copies/μl,ORF2方法可达1.0×102 copies/μl。用建立的2种荧光定量PCR方法分别对80份临床样品进行检测并对结果进行比较,结果表明,其中72份临床样品的定量结果数量级基本一致,有8份临床样品的定量结果数量级不一致。利用 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对8份样品进行了检测,证明这8份样品中确实存在 P1的感染。[结论]基于ORF1建立的定量检测方法更为准确,可用于PCV2的快速诊断和定量检测。
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关 键 词: | 猪圆环病毒2型 TaqMan荧光定量 ORF1 ORF2 类猪圆环病毒因子 P1 |
Establishment and Comparison of Two TaqMan Real-time PCR Methods for PCV2 |
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Abstract: | |
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Keywords: | PCV2 TaqMan real-time PCR ORF1 ORF2 PCV2-like factor P1 |
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