| 猪伪狂犬病毒SYBR-Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立 |
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| 作者姓名： | 李明凤 魏战勇 郭显坡 贾艳艳 陈红英 王学兵 崔保安 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院,河南郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南郑州,450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州,450002 |
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| 基金项目： | 河南省杰出科研人才创新工程项目，河南省重点科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 利用PCR技术扩增出猪伪狂犬病毒gH基因中187 bp的片段,并克隆到pGEM T栽体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线.建立了猪伪狂犬病毒的荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达1.26×102拷贝·μL-1,与猪圆环病毒,猪细小病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪瘟病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对15份疑似病料进行了检测.发现均为荧光定量PCR阳性,而常规PCR只能检测出6份阳性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床PRV感染的检测.
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| 关 键 词： | 猪伪狂犬病毒 SYBR-Green Ⅰ 实时荧光定量PCR 标准曲线 |
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