弓形虫棒状体蛋白15的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 |
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作者姓名: | 蒋鹏 王泽祥 车亮 王由森 孙晓林 |
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作者单位: | 甘肃农业大学动物医学院 |
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基金项目: | 甘肃省自然科学基金项目(21JR7RA823);;家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金项目(SKLVEB2019KFKT005); |
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摘 要: | 【目的】克隆弓形虫(Toxoplasma gondii)RH虫株速殖子的棒状体蛋白15(ROP15)基因,原核表达、纯化重组蛋白,并制备多克隆抗体。【方法】根据GenBank登录的弓形虫RH株ROP15(DQ096561.1)基因序列设计了1对引物,以提取的弓形虫RH虫株速殖子RNA为模板,通过RT-PCR获得该虫株的ROP15基因,将该基因连接至原核表达载体pGEX-4T-1上,获得重组质粒pGEX-4T-ROP15,测序结果与预期结果一致;转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导获得重组融合蛋白,运用亲和层析法纯化可溶性ROP15重组蛋白,SDS-PAGE对表达和纯化的目的蛋白进行分析。用纯化的ROP15重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,运用Western blot分析特异性。【结果】成功克隆了弓形虫RH虫株速殖子ROP15基因,大小为924 bp;菌液PCR和酶切鉴定表明重组质粒pGEX-4T-ROP15构建成功,获得了约59 ku的可溶性融合蛋白表达产物;以纯化的可溶性ROP15重组表达蛋白为抗原制备兔源性抗血清,Western blot显示该多克隆抗体与ROP...
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关 键 词: | 弓形虫 棒状体 棒状体蛋白15 原核表达 纯化 多克隆抗体 |
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