小檗碱和miRNA-18b对猪IVF胚胎HIF-1α的调控作用

【目的】探明miRNA-18b和HIF-1α之间的关系。【方法】以NCSU-23胚胎培养液为对照组,Ber加入NCSU-23培养液中为Ber组,在对照组的原核胚细胞质中显微注射10pLmiRNA-18b过表达剂(agomir)、低表达剂(antagomir)和阴性片段分别为miRNA-18bagomir组、miRNA-18bantagomir组和阴性片段对照(NC)组。观察IVF胚胎2-、4-、8-细胞和桑椹胚、囊胚发育率;通过qRT-PCR、Western-blot和双荧光素酶报告基因的方法验证miRNA-18b的靶基因HIF-1α。【结果】Ber组和miRNA-18bantagomir组,可极显著提高猪IVF囊胚发育率(P0.01)。Ber组和miRNA-18bantagomir组能上调猪IVF胚胎中HIF-1α表达水平,miRNA-18b agomir组能下调HIF-1α表达水平;HIF-1α的表达水平随着胚胎发育呈上升趋势,4-～8-细胞阶段更为明显;在HIF-1α的3’UTR wt、mut重建载体转染产生的双萤光素酶活性上,miRNA-18b与NC组均无差异(P0.05)。【结论】Ber和抑制miRNA-18b的表达能够促进4-、8-细胞和桑椹胚时期HIF-1α的表达从而促进猪IVF胚胎体外发育,其中4-～8-细胞时期作用更为明显。