| HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 |
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| 引用本文： | 刘纪玉,杜以军,刘星,吴家强,李俊,丛晓燕,赵新华,徐绍建,孙文博,时建立,单虎,王金宝.HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J].中国畜牧兽医,2013,0(5):1-7. |
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| 作者姓名： | 刘纪玉 杜以军 刘星 吴家强 李俊 丛晓燕 赵新华 徐绍建 孙文博 时建立 单虎 王金宝 |
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| 作者单位： | 1. 青岛农业大学, 山东省预防兽医学重点实验室, 山东青岛 266109;2. 山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室, 山东济南 250100;3. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所, 山东济南 250100 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31100119、31170146);青岛市科技基金(11-2-3-24-nsh);山东省生猪产业创新团队建设;公益性行业(农业)科研专项经费(201303046);山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2012NY012)。 |
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| 摘 要： | 本试验旨在建立一种用SYBR GreenⅠ荧光染料检测HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d(T)15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和熔解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时荧光定量RT-PCR方法,检测FMDV L蛋白对Ⅰ型IFN效应因子的抑制效果。HeLa细胞在转染FMDV L蛋白真核表达质粒,并受到Ⅰ型IFN刺激后ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR的相对表达量较转染空载体或表达GST的真核表达质粒明显降低。本试验建立了HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的实时荧光定量RT-PCR检测方法,为在mRNA水平上对HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的定量分析奠定了基础,并成功地初步应用于FMDV L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路的研究中。
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| 关 键 词： | 实时荧光定量RT-PCR SYBR Green Ⅰ 口蹄疫病毒 L蛋白 干扰素 |
| 收稿时间： | 2012-10-22 |
Establishment and Preliminary Application of a Real-time Fluorescent Quantitative RT-PCR Assay for Detection of Type Ⅰ Interferon Effect Factor of HeLa Cells |
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| LIU Ji-yu,DU Yi-jun,LIU Xing,WU Jia-qiang,LI Jun,CONG Xiao-yan,ZHAO Xin-hua,XU Shao-jian,SUN Wen-bo,SHI Jian-li,SHAN Hu,WANG Jin-bao.Establishment and Preliminary Application of a Real-time Fluorescent Quantitative RT-PCR Assay for Detection of Type Ⅰ Interferon Effect Factor of HeLa Cells[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2013,0(5):1-7. |
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| Authors: | LIU Ji-yu DU Yi-jun LIU Xing WU Jia-qiang LI Jun CONG Xiao-yan ZHAO Xin-hua XU Shao-jian SUN Wen-bo SHI Jian-li SHAN Hu WANG Jin-bao |
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| Institution: | 1. Shandong Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China;2. Shandong Key Laboratory of Animal Disease Control and Breeding, Jinan 250100, China;3. Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Real-time fluorescent quantitative RT-PCR SYBR GreenⅠ foot and mouth disease virus L protein interferon |
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