刺梨ISSR-PCR反应体系的建立和优化 |
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作者姓名: | 王小平 何波 向素琼 汪卫星 何桥 郭启高 李晓林 梁国鲁 |
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作者单位: | 西南大学园艺园林学院,重庆400715 |
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摘 要: | 以刺梨为试材,对影响ISSR.PCR扩增结果的主要影响因素包括Mg^2+、TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物、模版DNA的浓度及引物退火温度进行了优化筛选。确立了适合刺梨ISSR.PCR分析的最佳反应体系,即20μL反应体系中各组分浓度分别为:10×buffer 2.0μL,Mgz+1.875mInoI/L。TaqDNA聚合酶1.0U,dNTPs0.1mmol/L,引物2.0μmol/L,模板DNA20ng。PCR扩增程序:94。c预变性5min,94℃变性1min,48℃退火温度45S,72℃延伸1min,34个循环,72℃后延伸6min。利用优化体系对3个刺梨品种进行体系稳定性检测,结果表明该优化体系的重复性和稳定性良好。
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关 键 词: | 刺梨 ISSR 优化体系 |
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