| 哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU的克隆、表达与免疫原性研究 |
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| 引用本文： | 黄辉,毛芝娟,陈吉刚. 哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU的克隆、表达与免疫原性研究[J]. 华中农业大学学报, 2010, 29(3): 346-350 |
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| 作者姓名： | 黄辉 毛芝娟 陈吉刚 |
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| 作者单位： | 华中农业大学水产学院,武汉,430070;浙江万里学院生物与环境学院,宁波,315100 |
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| 基金项目： | 浙江省自然科学基金项目,宁波市科技局择优委托项目 |
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| 摘 要： | 根据已发表的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)外膜蛋白OmpU的基因序列设计1对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法,自哈维氏弧菌致病菌株基因组中扩增获得一段约1 000 bp的序列,构建重组载体pMD18-T-OmpU;测序结果表明,该基因与已发表的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU序列存在98%以上的相似性,该序列在GenBank上的登录号为FJ919231.构建表达质粒pET-30a(+)-OmpU后转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下实现高效表达,SDS-PAGE显示重组蛋白分子质量约为41 ku,与预期基本相符.重组蛋白以包涵体形式表达.以脲素法得到初步纯化的重组蛋白,以50 μg/mL的剂量注射免疫大黄鱼幼鱼,经间接ELISA法检测了4~8周后特异性抗体的效价,同时检测了注射后4周的免疫保护率.结果表明,4~8周内特异性抗体效价持续升高,达到log2 8.0以上,4周时的相对免疫保护率为85%.试验结果显示了重组哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU具有良好的免疫原性,可作为亚单位疫苗的开发对象.
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| 关 键 词： | 哈维氏弧菌 外膜蛋白OmpU 克隆 原核表达 免疫原性 |
| 收稿时间： | 2010-01-05 |
| 修稿时间： | 2010-03-01 |
Cloning,Expression and Immunogenicity Analysis of OmpU of Vibrio harveyi ZJ 2008 |
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| HUANG Hui,MAO Zhi-juan and CHEN Ji-gang. Cloning,Expression and Immunogenicity Analysis of OmpU of Vibrio harveyi ZJ 2008[J]. Journal of Huazhong Agricultural University, 2010, 29(3): 346-350 |
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| Authors: | HUANG Hui MAO Zhi-juan CHEN Ji-gang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio harveyi OmpU cloning prokaryotic expression immunogenicity |
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