蛋黄果SCoT-PCR反应体系的建立与优化

为建立和优化蛋黄果SCoT-PCR反应体系，以“仙桃1号”蛋黄果为试材，SCoT1为引物，采用L₁₆(4⁵)正交试验，对影响SCoT-PCR反应的DNA、Mg²⁺、dNTPs、引物及Taq聚合酶等因素进行优化；并选用3份地理位置相距较远的蛋黄果种质为模板，对优化反应体系进行验证。结果表明，不同因素对蛋黄果SCoT-PCR反应体系的影响存在差异，但不显著，其中最大的影响因素是Taq聚合酶含量，其次是dNTPs浓度、模板DNA含量、引物浓度和Mg²⁺浓度。蛋黄果SCoT-PCR最佳反应体系(20μL)为模板DNA 80 ng、3 mmol/L Mg²⁺、0.25 mmol/L dNTPs、0.4μmol/L引物、Taq 2 U。在该体系下，3份蛋黄果种质均能稳定扩增出清晰明亮、数目丰富且稳定性高的条带，说明优化的SCoT-PCR反应体系适用于蛋黄果SCoT分子标记。