| 牛分枝杆菌融合基因hsp65-esat6的原核表达及产物的纯化 |
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| 引用本文： | 迟磊 刘思国 宫强 王春来 赵昆 王勇 刘建东 刘慧芳 周媛媛 常月红 云孟克 赵福广. 牛分枝杆菌融合基因hsp65-esat6的原核表达及产物的纯化[J]. 中国兽医科技, 2007, 37(3): 223-226 |
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| 作者姓名： | 迟磊 刘思国 宫强 王春来 赵昆 王勇 刘建东 刘慧芳 周媛媛 常月红 云孟克 赵福广 |
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| 作者单位： | [1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001 [2]吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118 |
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| 基金项目： | 国家科技攻关计划项目（2002BA518A04） |
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| 摘 要： | 以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增hsp65和esat6基因。采用重叠延伸剪接技术（SOE）获得了融合基因hsp65-esat6，将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a（＋）上，构建重组质粒pET65-E6，将其转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，以IPTG诱导（终浓度为1mmol／L），表达产物进行SDS—PAGE分析。以Ni^2＋亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western—blot分析该融合蛋白的免疫活性。结果表明：Hsp65-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达。表达的融合蛋白裂解为两部分，即58ku和30ku，二者相加与预测大小88ku相符。纯化的融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应。
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| 关 键 词： | 牛分枝杆菌 融合基因 原核表达 纯化 |
| 文章编号： | 1673-4696（2007）03-0223-04 |
| 收稿时间： | 2006-11-16 |
| 修稿时间： | 2007-01-19 |
Prokaryotic expression of the fusion gene hsp65-esat6 of Mycobacterium bovis and purification of the expressed protein |
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| CHI Lei ,LIU Si-guo ,GONG Qiang ,WANG Chun-lai ,ZHAO Kun ,WANG Yong ,LIU Jian-dong , LIU Hui-fang ,ZHOU Yuan-yuan ,CHANG Yue-hong ,YUN Meng-ke ,ZHAO Fu-guang. Prokaryotic expression of the fusion gene hsp65-esat6 of Mycobacterium bovis and purification of the expressed protein[J]. Chinese Journal of Veterinary Science and Technology, 2007, 37(3): 223-226 |
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| Authors: | CHI Lei LIU Si-guo GONG Qiang WANG Chun-lai ZHAO Kun WANG Yong LIU Jian-dong LIU Hui-fang ZHOU Yuan-yuan CHANG Yue-hong YUN Meng-ke ZHAO Fu-guang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycobacterium boris fusion gene prokaryotic expression purification |
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