鸡传染性支气管炎病毒Real-time PCR方法的建立及其对感染鸡体内病毒的检测

本研究针对传染性支气管炎病毒（IBV）tl／CH／LDT3／03毒株的N基因（GenBank登录号为AY702975）设计并合成了一对引物，构建重组质粒作为阳性标准品，建立了检测IBV核酸的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法可检测到初始模板中6．45×10copies／μL的病毒核酸。与常规PCR相比，敏感性高100倍。该检测方法特异性强，与其它禽源病毒如新城疫病毒（NDV）、传染性喉气管炎病毒（ILTV）、传染性法氏囊病毒（IBDV）、禽流感病毒（AIV）、马立克氏病毒（MDV）均不发生交叉反应；重复性试验的变异系数小于2．6％。结果表明，本试验建立的荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可用于传染性支气管炎的临床诊断。同时应用本方法对人工感染IBV的SPF鸡的主要脏器盲肠扁桃体、肾脏、肺和气管进行了病毒RNA定量检测，结果表明，肾脏的病毒含量最高，盲肠扁桃体中病毒持续的时间最长，从而揭示了IBV在SPF鸡体内复制的动态变化，证实了感染鸡的临床表现与病毒滴度的时间相关性。

Development of a Real-time PCR assay for detection of infectious bronchitis virus