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稀有放线菌小单孢菌与大肠杆菌接合转移体系的构建
作者姓名:陈鑫  杨振飞  朱芮  肖延辉  郭利  王晓丽  李晓华
作者单位:中南民族大学生命科学学院/生物技术国家民委重点实验室,武汉 430074;中南民族大学生命科学学院/生物技术国家民委重点实验室,武汉 430074;中南民族大学生命科学学院/生物技术国家民委重点实验室,武汉 430074;中南民族大学生命科学学院/生物技术国家民委重点实验室,武汉 430074;湖北省襄阳市烟草专卖局,襄阳 441003;湖北省襄阳市烟草专卖局,襄阳 441003;中南民族大学生命科学学院/生物技术国家民委重点实验室,武汉 430074
基金项目:国家自然科学基金项目(31070087,30570046);湖北省自然科学基金重点项目(2011CDA079);湖北省烟草公司面上项目(0710XYYC2012-01);国家大学生创新创业训练项目(GCX13104) ;“十二五”中南民族大学国家级民族药学实验教学中心建设项目
摘    要:为将外源基因导入小单孢菌,建立小单孢菌(Micromonospora)与大肠杆菌两亲接合转移方法,将包含小单孢菌内源质粒pJTU112复制区的4.7kb片段插入质粒pOJ260的BamHⅠ酶切位点,构建了能在大肠杆菌和小单孢菌中复制的穿梭载体pSCU207,将质粒pSCU207转化大肠杆菌ET12567/pUZ8002,再与小单孢菌LXH20进行两亲接合转移,挑取接合转移子,并进行验证。结果表明:质粒pSCU207通过大肠杆菌与小单孢菌新鲜菌丝之间接合转移导入小单孢菌中,并可稳定遗传;大肠杆菌与小单孢菌新鲜菌丝之间的最佳接合转移体积是40μL和400μL。

关 键 词:小单孢菌  接合转移  质粒pSCU207  抗生素的敏感性  质粒稳定性
收稿时间:2014-06-09
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