| 毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测 |
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| 作者姓名： | 范丙友 胡诗宇 陆海 蒋湘宁 |
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| 作者单位： | 北京林业大学生物科学与技术学院,国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学生物科学与技术学院,国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学生物科学与技术学院,国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学生物科学与技术学院,国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室 |
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| 摘 要： | 为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性,构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1．经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60 kD,与预测值一致．对毛白杨4-CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系进行了优化,确定IPTG的最佳浓度为0.4 mmol/L,诱导时的菌液密度OD600为0.3～0.5,最佳表达时间为2 h．37℃下表达的4CL1融合蛋白以包涵体的形式存在,没有生物学活性．当表达温度从37℃降低为28℃时,可溶性的有生物学活性的毛白杨4CL1蛋白诱导表达获得成功,表达量达11%．以耦联有Ni2+-NTA的琼脂糖为亲和层析填料,金属鳌合亲和柱层析一步纯化获得了电泳纯4CL1蛋白,4CL1蛋白对5种底物的比活性分别为:4-香豆酸3 949.0 pkat/mg,咖啡酸2 214.0 pkat/mg,阿魏酸715.0 pkat/mg,肉桂酸84.9 pkat/mg,而对芥子酸没有生物活性．
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| 关 键 词： | 毛白杨 4-香豆酸:辅酶A连接酶 可溶性原核表达 酶活性 |
| 文章编号： | 1000-1522（2006）02-0001-08 |
| 收稿时间： | 2005-07-10 |
| 修稿时间： | 2005-07-10 |
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