| pVLT-EGFP载体构建及其在巴西固氮螺菌（Azospirillum brasilense）表达研究 |
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| 引用本文： | 王继雯.pVLT-EGFP载体构建及其在巴西固氮螺菌（Azospirillum brasilense）表达研究[J].中国农学通报,2015,31(5):96-101. |
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| 作者姓名： | 王继雯 |
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| 作者单位： | 河南省微生物重点实验室，河南省科学院生物研究所有限责任公司 |
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| 基金项目： | 2013年河南省基础前沿项目“巴西固氮螺菌定殖及其促生长机理研究”(132300413219),2012年河南省重大科技专项“新型复合微生物肥料关键技术研究及产业化”(121100110100)；2013年省级科技基础平台建设专项经费项目“新型农业微生物菌剂的研制及应用”[豫财政(2013)435号]；2014年河南省科学院预研项目“固氮芽孢杆菌的筛选及其竞争适应能力研究”。 |
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| 摘 要： | 为了研究巴西固氮螺菌（Azospirillum brasilense）在植物体内的定殖，利用酶切连接的方法，以增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）基因与表达载体pVLT-33为基本元件，构建了重组表达载体pVLT-EGFP，电转巴西固氮螺菌R7细胞，并利用实时荧光定量PCR (qPCR) 研究了不同温度、不同时间EGFP mRNA的表达情况。酶切及测序结果表明成功构建了pVLT-EGFP载体，并在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达；qPCR结果显示：30 ℃，诱导9 h EGFP基因的表达水平最高。本研究成功构建了重组表达载体pVLT-EGFP，为实现pVLT-EGFP的可控表达及研究固氮菌在植物体内的定殖规律及促生长机理提供了一种有效的途径。
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| 关 键 词： | 巴西固氮螺菌，增强型绿色荧光蛋白（EGFP），表达载体，实时荧光定量PCR (qRT-PCR) |
| 收稿时间： | 9/1/2014 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 2/5/2015 12:00:00 AM |
Construction of an expression vector pVLT-EGFP can be expressed in Azospirillum brasilense |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Azospirillum brasilense enhanced green fluorescent protein (EGFP) expression vector qPCR |
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