呋喃唑酮代谢物人工抗原的制备与鉴定

制备了呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-■唑烷酮(AOZ)的人工抗原，再采用重氮法将AOZ衍生物2-NP-AOZ与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联，制备免疫原2-NP-AOZ-BSA和包被原2-NP-AOZ-OVA,通过SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS分析其偶联效果。以2-NP-AOZ-BSA皮下注射免疫SPF级BALB/c小鼠，分别于3次免疫和5次免疫后制备血清，以间接ELISA检测血清中2-NP-AOZ抗体效价，间接竞争ELISA检测血清敏感性，鉴定其免疫原性。发现2-NP-AOZ分别与BSA和OVA偶联成功，获得免疫原2-NP-AOZ-BSA和包被原2-NP-AOZ-OVA;MALDI-TOF-MS分析测得偶联率分别为7.1∶1、3.8∶1;BCA试剂盒检测2-NP-AOZ-BSA、2-NP-AOZ-OVA的浓度分别为4.9、5.2 mg/mL。间接ELISA检测3次免疫后小鼠血清抗体效价均达1∶16 000及以上，5次免疫后血清抗体效价均达1∶32 000及以上；半数抑制浓度(IC₅₀)为34.43 ng/mL,人工抗原2-NP-...