豆类活性肽PA1b在大肠杆菌中的多拷贝串联表达

为构建能表达串联豆类活性肽PA1b(pea albumin 1 subunit b)基因的重组大肠杆菌，并进行诱导表达和产物纯化。通过合成PA1b基因，采用同尾酶技术构建1～4拷贝数的串联PA1b基因，分别克隆至pET32a(+)原核表达载体上，转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达，亲和层析纯化融合蛋白，肠激酶切除融合标签和切开串联体，获得单体PA1b肽。结果显示，大肠杆菌转化子中的重组质粒pET32a(+)-nPA1b(n=1～4)经PCR及测序验证正确，经1 mmol/L IPTG 25℃诱导8 h,均能以包涵体形式表达出重组融合蛋白。SDS-PAGE分析结果表明，串联拷贝数越多，融合蛋白中PA1b含量越高。Ni-NTA亲和纯化得到高纯度的4拷贝串联PA1b融合蛋白，经肠激酶充分酶切、超滤浓缩后获得重组PA1b多肽。获得了表达1～4拷贝串联PA1b基因的重组大肠杆菌，并通过酶解4拷贝PA1b融合蛋白制备了重组PA1b,为多拷贝法制备PA1b肽奠定基础。