猪伪狂犬病病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

当前猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）仍是猪场常见的病原之一，给我国生猪养殖业造成了巨大的经济损失。为建立一种基于SYBR Green的PRV实时荧光定量PCR检测方法，以PRV-gE基因序列为靶标，构建pUCmT-gE重组质粒（并作为阳性质粒），针对该基因设计特异性引物，并评估该方法的灵敏性、特异性和可重复性等指标。结果表明，该方法检测下限为4.545拷贝/μL，而普通PCR检测下限为4.545×102拷贝/μL；在90.0℃出现单一的溶解峰，并与PCV2（圆环病毒2型）、PPV（细小病毒）、PRRSV（蓝耳病病毒）、PEDV（流行性腹泻病毒）和TGEV（传染性胃肠炎病毒）等不产生交叉反应。此外，该方法对15份疑似感染伪狂犬病的临床样品检出率为20%(3/15)，高于常规PCR检出率（13.33%,2/15）。因此，该方法较传统PCR具有更高灵敏性，更适合用于PRV的临床早期诊断。