新型冠状病毒E基因真核表达载体的构建及表达

囊膜蛋白（E蛋白）是新型冠状病毒（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2,SARS-CoV-2)的小包膜蛋白，在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为了更有利地研究SARS-CoV-2 E蛋白的生物学功能，研究成功构建了SARS-CoV-2 E基因的真核表达载体。首先，通过PCR技术扩增SARS-CoV-2 E基因，并将pCMV-Myc载体进行双酶切。随后，利用同源重组将SARS-CoV-2 E基因连接至pCMV-Myc载体。经酶切和测序鉴定发现，SARS-CoV-2 E基因成功克隆至pCMV-Myc载体中，并将重组质粒命名为pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E。将重组质粒pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E转染至HEK-293T细胞，利用Western Blot和间接免疫荧光技术检测重组质粒的表达以及定位情况。结果表明，重组质粒pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E在HEK-293T细胞中成功表达，并且发现重组蛋白主要分布于胞质，少量存在于胞核，为进一步研究SARS-CoV-2 E蛋白的功能奠定基础。