溶血性曼氏杆菌PlpE基因原核表达及间接ELISA方法的建立 |
| |
引用本文: | 张智,刘泽,杜宇,乌吉斯古楞,刘重阳,宋庆庆,关平原,任旭荣.溶血性曼氏杆菌PlpE基因原核表达及间接ELISA方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医,2022(2):79-84. |
| |
作者姓名: | 张智 刘泽 杜宇 乌吉斯古楞 刘重阳 宋庆庆 关平原 任旭荣 |
| |
作者单位: | 1. 金宇保灵生物药品有限公司/兽用疫苗国家工程实验室;2. 内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室 |
| |
摘 要: | 为了建立一种能够方便、高效检测溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的方法,试验将溶血性曼氏杆菌重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,然后经IPTG诱导表达并纯化。以重组蛋白PlpE为包被抗原,通过优化抗原最佳包被浓度、一抗及二抗最佳稀释度、最佳反应时间和最佳显色时间等试验条件,建立了检测PlpE抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组质粒pET-32a-PlpE转化至感受态细胞BL21(DE3)后利用IPTG诱导,重组蛋白主要在沉淀中大量表达,经包涵体纯化试剂盒纯化后获得纯度较高的目的蛋白。重组蛋白PlpE具有良好的反应性,且蛋白大小符合预期。确定的检测条件为抗原包被浓度2μg/mL,一抗稀释度1∶300,酶标二抗稀释度1∶80 000,反应时间45 min,一抗反应时间30 min,显色时间15 min。用该方法检出溶血性曼氏杆菌阳性血清的最低效价可达1∶1 280,检测牛病毒性腹泻病毒阳性血清、牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清、口蹄疫病毒阳性血清、副结核分枝杆菌阳性血清、布鲁氏杆菌阳性血清,结果均为阴性;批内重复性试验和批间重复性...
|
关 键 词: | 牛 溶血性曼氏杆菌 PlpE基因 原核表达 间接ELISA |
|
|