| 猪星状病毒nsP1a/4蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 刘燚,董覃婷,朱鑫玥,张广欣,吴奥祺,陈樱,欧阳康,韦祖樟,黄伟坚.猪星状病毒nsP1a/4蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备[J].黑龙江畜牧兽医,2022(21):75-79. |
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| 作者姓名： | 刘燚 董覃婷 朱鑫玥 张广欣 吴奥祺 陈樱 欧阳康 韦祖樟 黄伟坚 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31760735)； |
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| 摘 要： | 为了获得猪星状病毒(Porcine astrovirus, PAstV)重组蛋白nsP1a/4和多克隆抗体nsP1a/4,试验采用PCR技术扩增得到nsP1a/4基因片段，通过双酶切技术鉴定重组表达质粒nsP1a/4-pET-32a。利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞表达重组蛋白nsP1a/4,通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白nsP1a/4表达情况及可溶性。利用Ni-Agarose Resin纯化重组蛋白nsP1a/4,再通过Western-bolt验证。以纯化的重组蛋白nsP1a/4免疫健康新西兰大白兔制备多克隆抗体nsP1a/4,通过Western-bolt检验多克隆抗体nsP1a/4的特异性。结果表明：试验扩增出nsP1a/4基因片段，成功构建出重组表达质粒nsP1a/4-pET-32a,重组蛋白nsP1a/4以包涵体形式在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中大量表达。经Ni-Agarose Resin纯化的重组蛋白nsP1a/4单一，Western-bolt成功鉴定到重组蛋白nsP1a/4,多克隆抗体nsP1a/4能与重组蛋白nsP1a/4发生特异性结合。说明试验成功制...
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| 关 键 词： | 猪星状病毒 非结构蛋白 nsP1a/4基因 原核表达 多克隆抗体 |
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