非洲猪瘟病毒p72/p32蛋白的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的建立与比较 |
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引用本文: | 吴青萍,李丹阳,卢丽飞,邹延林,耿鑫梅,奚媖牡,黄香梅,韦英明,黄伟坚.非洲猪瘟病毒p72/p32蛋白的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的建立与比较[J].黑龙江畜牧兽医,2022(13):20-26. |
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作者姓名: | 吴青萍 李丹阳 卢丽飞 邹延林 耿鑫梅 奚媖牡 黄香梅 韦英明 黄伟坚 |
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作者单位: | 广西大学动物科学技术学院 |
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基金项目: | 国家重点研发计划项目(2021YFD1100100); |
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摘 要: | 为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的间接ELISA方法,试验基于p72/p32基因序列,构建了重组质粒pCold-p72/p32,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,利用IPTG诱导获得相应的重组蛋白,通过SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式,利用Ni2+柱亲和层析法纯化p72/p32重组蛋白,并以此为包被抗原建立2种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并对方法的临界值、有无交叉反应、重复性及敏感性进行了检测,并对来自不同猪场的临床样本进行验证性检测。结果表明:试验成功构建了重组质粒pCold-p72/p32,2种重组蛋白均能与ASFV阳性血清反应;p32以可溶性蛋白和包涵体蛋白形式表达,p72以包涵体蛋白形式表达。基于p32重组蛋白所建立的间接ELISA方法的临界值为0.543,基于p72重组蛋白所建立的间接ELISA方法的临界值为0.612;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%;与猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等常见病原的阳性血清无交叉反应;与商品化的非...
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关 键 词: | 非洲猪瘟病毒 间接ELISA方法 p72蛋白 p32蛋白 比较 |
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