| 猪NMB基因过表达载体的构建及其在猪睾丸间质细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 王小雨,何丹,孙月,於惠娴,马卓,于畅,马志禹.猪NMB基因过表达载体的构建及其在猪睾丸间质细胞中的表达[J].黑龙江畜牧兽医,2022(17):74-78+141-142. |
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| 作者姓名： | 王小雨 何丹 孙月 於惠娴 马卓 于畅 马志禹 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31802149)；;中国博士后科学基金项目(2019M651985)；;江苏省自然科学基金项目(BK20180919)；;江苏省博士后科学基金项目(2018K207C)；;扬州大学大学生科技创新基金项目(X20200698)； |
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| 摘 要： | 为了构建猪神经介素B(pNMB)基因慢病毒过表达载体，以及研究其在猪睾丸间质细胞中稳定表达情况，试验采用RT-PCR方法扩增获得pNMB基因的CDS序列，插入到pMD-19T载体中，构建pMD19-T-pNMB重组质粒，对该重组质粒和慢病毒过表达质粒pCD513B-1进行双酶切，以获得的线性化pCD513B-1和线性化pNMB质粒构建pCD513B-1-pNMB重组慢病毒过表达载体；将重组慢病毒过表达载体pCD513B-1-pNMB和辅助质粒(pGag/Pol、pRev和pVSV-G)共转染至HEK293T细胞中，包装获得pNMB过表达慢病毒，并用倍比稀释法测定病毒含量；用pNMB过表达慢病毒转染猪睾丸间质细胞，通过嘌呤霉素抗性筛选获得稳定表达的细胞，利用实时荧光定量PCR方法检测pNMB mRNA的表达情况。结果表明：RT-PCR扩增获得大小约为366 bp的目的片段，与GenBank中pNMB基因的CDS序列完全一致，RT-PCR扩增片段与目的片段序列完全相同；将pNMB基因克隆到pMD-19T载体中，成功构建出pMD19-T-pNMB重组质粒；XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切重组质粒p...
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| 关 键 词： | 神经介素B(NMB) 慢病毒 过表达 pCD513B-1 睾丸间质细胞 猪 |
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