| 家兔DEPTOR基因过表达和shRNA干扰慢病毒载体的构建与验证 |
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| 引用本文： | 邹灵秀,农恬颖,吴咏梅,邓彦飞.家兔DEPTOR基因过表达和shRNA干扰慢病毒载体的构建与验证[J].黑龙江畜牧兽医,2022(23):7-13+131. |
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| 作者姓名： | 邹灵秀 农恬颖 吴咏梅 邓彦飞 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31760334)；;广西教育厅科研项目(2019KY0048)； |
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| 摘 要： | 为了构建DEPTOR基因的过表达载体和shRNA干扰慢病毒载体，并验证载体的有效性，试验采用RT-PCR方法扩增兔DEPTOR基因编码区(CDS)序列，得到DEPTOR基因片段，同时合成DEPTOR基因的shRNA干扰序列。将DEPTOR基因片段分别连接到慢病毒真核表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1和融合表达载体pEGFP-N1上，获得过表达载体pLVX-DEPTOR-IRES-ZsGreen1和pEGFP-DEPTOR;将shRNA干扰序列连接到慢病毒干扰载体pSicoR-Ef1a-mCh上，获得shRNA干扰慢病毒载体pSicoR-shRNA-508。用过表达载体转染HEK 293T细胞，72 h后观察荧光蛋白的表达情况并收集细胞，RT-PCR检测细胞水平上DEPTOR基因的表达情况。使用多质粒共同转染法，将过表达载体pEGFP-DEPTOR与shRNA干扰慢病毒载体pSicoR-shRNA-508按照1∶1比例转染HEK 293T细胞，72 h后观察荧光蛋白的表达情况并收集细胞，采用实时荧光定量PCR方法检测shRNA干扰序列对DEPTOR基因表达的干扰效率。结果表明：...
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| 关 键 词： | DEPTOR基因 家兔 慢病毒载体 RNA干扰 转染 |
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