鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达与反应原性分析

为了利用原核表达系统表达鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus, DTMUV)E蛋白，试验利用RT-PCR方法扩增DTMUV E基因，经核苷酸序列测定后，与pET-30a(+)载体连接，然后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，构建重组表达载体pET-DTMUV-E,再转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导表达DTMUV E蛋白，通过SDS-PAGE分析表达产物，Western-blot方法鉴定反应原性，分别从诱导时间和IPTG浓度方面对表达条件进行优化，并进行表达产物的可溶性分析。结果表明：克隆得到大小约为1 503 bp的DTMUV E基因，并成功与pET-30a(+)载体连接，获得分子质量约65 ku的融合蛋白，可以与兔抗6×His多克隆抗体和鸡抗DTMUV多克隆抗体发生特异性免疫反应，终浓度为4 mmol/L的IPTG诱导4 h为最佳表达条件，重组蛋白DTMUV E主要以包涵体形式表达。说明利用原核表达系统表达的以包涵体形式存在的DTMUV E蛋白，具有较好的反应原性。