| 草鱼Ⅱ型干扰素的单克隆抗体制备与鉴定 |
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| 引用本文： | 朱晓真,王俊亚,贾钊,王梓璇,王邦杰,邹钧. 草鱼Ⅱ型干扰素的单克隆抗体制备与鉴定[J]. 水产学报, 2022, 46(8): 1487-1498 |
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| 作者姓名： | 朱晓真 王俊亚 贾钊 王梓璇 王邦杰 邹钧 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学水产与生命学院,上海海洋大学水产与生命学院,上海海洋大学水产与生命学院,上海海洋大学水产与生命学院,上海海洋大学水产与生命学院,上海海洋大学水产与生命学院 |
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| 摘 要： | Ⅱ型干扰素，也称干扰素-γ（IFN-γ），是参与辅助性T淋巴细胞1（Th1）免疫应答的关键细胞因子之一。研究表明，鱼类与哺乳类Ⅱ型干扰素同源，不同的是真骨鱼类（Teleost）有两种Ⅱ型干扰素，即IFN-γ和干扰素-γ相关因子（IFN-γrel）。迄今，对鱼类IFN-γ基因的表达规律和功能已有大量报道，而对IFN-γrel的研究尚不深入，产生IFN-γ和IFN-γrel的细胞来源不清楚，它们是否有功能差异也存在争议。为此，本研究构建原核表达质粒，在大肠杆菌DE3中表达草鱼（Ci）IFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白。实验结果显示，重组CiIFN-γ蛋白为可溶性蛋白，而CiIFN-γrel蛋白则不可溶。通过亲和层析和分子筛层析获得了高纯度CiIFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白，免疫小鼠制备了单克隆抗体。通过Western Blotting筛选获得4株特异性高、亲和力强的抗体，结果表明CiIFN-γ单克隆抗体与CiIFN-γrel没有交叉反应，反之亦然，其中FITC标记的两株抗体可用于免疫荧光和流式细胞术分析。此外，Western Blotting分析显示草鱼IFN-γ和IFN-γrel单克隆抗体不识别斑马鱼的同源Ⅱ型干扰素蛋白。本研究制备了首个IFN-γrel的单克隆抗体，为深入研究草鱼Ⅱ型干扰素的产生和生物学功能奠定基础。
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| 关 键 词： | 草鱼 II型干扰素 重组蛋白 单克隆抗体 免疫分析 |
| 收稿时间： | 2021-08-31 |
| 修稿时间： | 2021-09-30 |
Generation and characterization of monoclonal antibodies for type II interferons in grass carp (Ctenopharyngodon idella) |
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| ZHU Xiaozhen,WANG Juny,JIA Zhao,WANG Zixuan,WANG Bangjie,ZOU Jun. Generation and characterization of monoclonal antibodies for type II interferons in grass carp (Ctenopharyngodon idella)[J]. Journal of Fisheries of China, 2022, 46(8): 1487-1498 |
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| Authors: | ZHU Xiaozhen WANG Juny JIA Zhao WANG Zixuan WANG Bangjie ZOU Jun |
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| Affiliation: | College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University,Shanghai,201306;China,College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University,Shanghai,201306;China,College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University,Shanghai,201306;China,College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University,Shanghai,201306;China,College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University,Shanghai,201306;China,College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University,Shanghai,201306;China |
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