| 甘蔗宿根矮化病PCR检测技术优化分析 |
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| 引用本文： | 周,丹,谢晓娜,陈明辉,杨丽涛,李杨瑞.甘蔗宿根矮化病PCR检测技术优化分析[J].南方农业学报,2012,43(5):616-620. |
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| 作者姓名： | 周 丹 谢晓娜 陈明辉 杨丽涛 李杨瑞 |
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| 作者单位： | 广西大学农学院,南宁530005亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁530005中国农业科学院甘蔗研究中心/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007广西农业科学院广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁530007 |
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| 基金项目： | 科技部国际合作项目（2008DFA30600，2009DFA30820）；广西自然科学基金创新研究团队项目（2011GXNSFF018002）； 广西农业科学院创新研究团队项目（桂农科2011YT01） |
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| 摘 要： | 目的]在PCR的基本程序上,以甘蔗宿根矮化病菌Lxx 16S~23S rDNA内部转录间隔区特异性引物,优化PCR反应条件,以建立稳定、快速、灵敏度高的甘蔗宿根矮化病PCR检测技术.方法]以Lxx基因组DNA为模板,采用TaKaRa的Ex Taq Polymerase和2×GCBuffer Ⅱ,调整退火温度和引物浓度等主要因子,优化PCR反应体系;稀释Lxx基因组DNA模板的浓度,检测优化PCR的灵敏度;用优化的PCR对田间生长的甘蔗品种GT11叶片总DNA进行RSD测定.结果]优化的PCR得到清晰特异的条带为Lxx 16S~23S rDNA内部转录间隔区序列;能从稀释1000倍的Lxx基因组DNA( 15.9 pg/μL)中检测到Lxx,而常规的PCR只能从稀释10倍的Lxx基因组DNA( 159 pg/μL)中检测到Lxx,且出现假阴性,不稳定.对田间生长的甘蔗品种GT11叶片总DNA进行PCR检测,结果用优化后的PCR检测RSD感染率为66.7%,而常规的PCR检测RSD感染率为0.结论]优化的PCR体系为:2xGC Buffer Ⅱ12.5 μL,Ex Taq DNA酶(5 U/μL)0.2 μL;dNTP(2.5 mmol/L)1.5 μL;Lxx1(10 μmol/L)1.0μL,Lxx2(10μmol/L)1.0 μL,DNA模板1.0 μL,用ddH2O双蒸水补足至25.0μLcPCR反应程序为:95℃预变性10 min,94℃ 15s,57℃ 15 s,72℃ 30 s,40个循环;72℃延伸10 min.优化的PCR比常规PCR的灵敏度高、结果稳定、检测效率高,更适合于田间大批量样品快速检测.
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| 关 键 词： | 甘蔗 宿根矮化病 PCR检测 16S～23S rDNA 优化体系 |
Optimization of PCR technique for detecting sugarcane ratoon stunting disease |
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| ZHOU Dan,XIE Xiao-na,CHEN Ming-hui,YANG Li-tao,LI Yang-rui.Optimization of PCR technique for detecting sugarcane ratoon stunting disease[J].Journal of Southern Agriculture,2012,43(5):616-620. |
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| Authors: | ZHOU Dan XIE Xiao-na CHEN Ming-hui YANG Li-tao LI Yang-rui |
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| Abstract: | （1 Agricultural College， Guangxi University Nanning 530005， China； 2 State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-bioresources， Nanning 530005， China； 3 Sugarcane Research Center， Chinese Academy of Agricultural Sciences / Guangxi Key Laboratory for Sugarcane Biotechnology and Genetic Improvement， Ministry of Agriculture/Guangxi
Key Laboratory for Sugarcane Genetic Improvement， Nanning 530007， China； 4 Guangxi Crop Genetic Improvement and Biotechnology Laboratory， Guangxi Academy of Agricultural Sciences， Nanning 530007， China） |
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| Keywords: | |
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