| 利用Cre/lox定位重组系统获得无选择标记GFP转基因烟草 |
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| 引用本文： | 宋洪元,任雪松,司军,李成琼,宋明.利用Cre/lox定位重组系统获得无选择标记GFP转基因烟草[J].中国农业科学,2008,41(10):2973-2982. |
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| 作者姓名： | 宋洪元 任雪松 司军 李成琼 宋明 |
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| 作者单位： | 西南大学园艺园林学院/重庆市蔬菜学重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，重庆市教委资助项目 |
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| 摘 要： | 【目的】利用Cre/lox系统具有的特异重组特性，以绿色荧光蛋白GFP为目的基因，获得无选择标记的GFP转基因烟草。【方法】将Bar基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与GFP基因表达盒融合后获得相应植物表达载体，转化烟草后获得抗除草剂Basta的GFP转基因植株。GFP转基因植株叶盘二次转化导入重组酶Cre基因后，实现与GFP基因连锁的Bar基因表达盒剔除，剔除Bar基因的植株开花后自交使重组酶Cre基因分离，获得无选择标记的GFP转基因烟草。【结果】将含Bar基因表达盒以及GFP基因表达盒的植物表达载体转化烟草Wisconsin 38后获得了抗除草剂Basta以及GFP荧光表达的转基因植株。随机抽取5株转基因植株二次转化导入Cre基因，所获得的再生植株叶盘进行Basta的抗性检测，绝大多数单株对应叶盘在含8 mg•L-1 PPT（phosphinothricin）的筛选培养基上无法再生死亡，删除效率在76%～100%。对Bar基因删除后区域片段进行克隆测序分析显示，Bar基因表达盒已经被精确删除。Bar基因删除植株开花后自交，获得的自交后代进行NPTⅡ抗性检测，NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有GFP基因。【结论】利用Cre/lox系统获得烟草无选择标记的转基因植物是稳定可行的,可广泛应用于其它无选择标记转基因植物的培育。
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| 关 键 词： | Cre/lox定位重组系统 无选择标记转基因烟草 绿色荧光蛋白 转基因 |
| 收稿时间： | 2007-6-15 |
Construction of Marker-free GFP Transgenic Tobacco by Cre/lox Site-specific Recombination System |
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| SONG Hong-yuan,REN Xue-song,SI Jun,LI Cheng-qiong,SONG Ming.Construction of Marker-free GFP Transgenic Tobacco by Cre/lox Site-specific Recombination System[J].Scientia Agricultura Sinica,2008,41(10):2973-2982. |
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| Authors: | SONG Hong-yuan REN Xue-song SI Jun LI Cheng-qiong SONG Ming |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cre/lox site-specific recombination system Marker-free transgenic tobacco GFP Gene modification |
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