毛花猕猴桃种质资源ISSR反应体系的建立和优化

以毛花猕猴桃种质资源为试验材料,通过正交实验设计对影响ISSR反应体系各个主要因素进行优化。研究结果表明,最佳ISSR-PCR反应体系为:总体积为20μL,2μL buffer(无Mg2+),1 mmol/L Mg2+,1 U Taq酶,0.25 mmol/L d NTPs,1μmol/L引物,80 ng模版DNA;扩增程序为94℃3 min;94℃30 s,50℃~60℃退火45 s,72℃1 min(40个循环);72℃7 min,12℃保存;引物UBC842的最佳退火温度为58℃。利用该体系,用引物UBC835对46份野生毛花猕猴种质资源进行扩增,扩增结果表明建立的ISSR-PCR反应体系重复性好,稳定性强。