鸡毒支原体黏附因子MGC2的克隆及原核表达

为表达鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)黏附基因MGC2蛋白,探索其作为诊断抗原的可能性,参考Gen Bank登录的鸡毒支原体F株MGC2基因序列,利用Primer 5.0软件设计合成引物,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)对鸡毒支原体MGC2基因的1个位点进行定点突变,将此突变基因克隆到表达载体p ET-30a(+)中,具有正确阅读框架的重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后采用SDS-PAGE和Western blot检测。结果表明,PCR扩增的目的基因大小约为918 bp;SDS-PAGE检测重组蛋白相对分子质量约为39.6 ku;Western blot检测表明重组蛋白具有鸡毒支原体反应原性。该研究结果为鸡毒支原体抗体ELISA检测方法的建立奠定基础。