| 表达鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建 |
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| 引用本文： | 程坚,刘秀梵,彭大新,吴艳涛.表达鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建[J].农业生物技术学报,2002,10(2):152-155. |
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| 作者姓名： | 程坚 刘秀梵 彭大新 吴艳涛 |
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| 作者单位： | 扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室,扬州,225009 |
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| 摘 要： | 以插入鸡Ⅱ型干扰素（IFN－Ⅱ）cDNA序列的重组质粒AIFN为模板，根据鸡痘病毒早晚期启动子PE／L的序列设计上上游引物，鸡IFN－Ⅱ基因的cDNA3'端序列设计了下游引物，采用PCR法扩增包括启动子PE／L和鸡IFN－Ⅱ全长cDNA序列的基因片段。将该扩增片段定向插入鸡痘病毒转移载体1175中，获重组转移载体1175IFN，用以转染已感染鸡痘病毒282E4疫菌株（wt-FPV)的鸡（Gallus gallus)胚成纤维细胞（CEF）。1175IFN与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了表达IFN－Ⅱ的重组鸡痘病毒rFPV-IFN-Ⅱ。通过在含X－gal的营养琼脂上连续挑选篮色病毒斑获得并纯化rFPV-IFN-Ⅱ。以细胞病变抑制实验证实，rFPV-IFN-Ⅱ感染的CEF表达了具有抗水泡性口炎病毒（VSV）活性的鸡IFN－Ⅱ。rFPV-IFN-Ⅱ(M.O.I=0.01)感染CEF72h后，培养上清中IFN－Ⅱ的表达量为1280U／mL。动物实验表明，rFPV-IFN-Ⅱ接种雏鸡7d或14d后，其在体内表达的IFN－Ⅱ可显著减轻载体鸡痘病毒对1日龄SPF雏鸡体重增长的抑制作用。
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| 关 键 词： | 表达 鸡Ⅱ型干扰素基因 重组鸡痘病毒 基因工程苗 |
| 修稿时间： | 2001年9月2日 |
Construction of Recombinant Fowlpox Virus Expressing Chicken Type Ⅱ Interferon |
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