双重RT-PCR体系检测美洲南瓜病毒病的研究

【目的】建立南瓜病毒病双重RT-PCR检测方法,检测南瓜多种病毒病.【方法】根据GenBank登录的WMV和ZYMV等病毒外壳蛋白基因序列,设计两对特异性引物,以复合感染4种病毒的南瓜病叶组织为材料,进行双重RT-PCR检测体系的优化.【结果】调查发现武威美洲南瓜病毒病种类有西瓜花叶病毒(WMV)、小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)、南瓜花叶病毒(SqMV)、烟草花叶病毒(TMV),症状类型有黄化、蕨叶、疱斑、黄化、疱斑混合症状、蕨叶、疱斑混合症状、蕨叶、疱斑、黄化混合症状.双重RT-PCR共检测到两种病毒ZYMV和WMV,双重RTPCR的最佳优化体系为:dNTPs浓度为0.3mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为0.5U,Mg~(2+)浓度为1.0mmol/L,最佳退火温度为50℃.双重RT-PCR检测体系验证表明从复合感染WMV和ZYMV的南瓜病叶上同时能够检测到这两种病毒,且片段大小分别为485和280bp的外壳蛋白.【结论】初步建立和优化了美洲南瓜病毒病双重RTPCR检测体系.