| EDS1多肽抗体的制备和应用 |
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| 引用本文： | 陈卓 刘开兴 于丹丹 刘家驹 王贞超 李向阳 毕亮 胡德禹 宋宝安. EDS1多肽抗体的制备和应用[J]. 中国农学通报, 2011, 27(30): 164-170 |
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| 作者姓名： | 陈卓 刘开兴 于丹丹 刘家驹 王贞超 李向阳 毕亮 胡德禹 宋宝安 |
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| 作者单位： | 贵州大学绿色农药与农业生物工程国家重点实验室培育基地,贵阳,550025 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划)“病毒及菌害调控的候选药物与分子靶标”(2010CB-126105); 农业科技成果转化资金项目“防治稻飞虱及其传媒病毒药剂中试与转化”(2009GB2F200330); 科技人员服务企业行动项目“防治水稻稻飞虱及其传媒病毒新型药剂的研发、产业化及应用示范推广”(2009GJF20047); 贵州省教育厅自然科学研究项目重点项目“新型抗植物病毒药物的化学生物学研究”[NO.黔科教(2009)0132号]; 贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目“新型抗植物病毒药物—病毒星与靶标分子的化学生物学研究”[NO.黔省专合字(2009)104号] |
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| 摘 要： | EDS1蛋白是植物寄主SA信号转导通路中重要调控功能的蛋白，为获得效价高和选择性强的EDS1抗体，本研究根据NCBI GenBank中报道的EDS1蛋白一级结构信息，采用Blastn和Blastx等生物信息学软件进行序列同源性分析，获得三段序列特异性较高的多肽，并从中优选一段序列特异性多肽，采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得序列特异性最好的多肽，采用HPLC和GC-MS测定合成多肽的浓度和分子量，试验表明目的多肽纯度达89.37%，目的多肽分子量为1978.33。采用碳化二亚胺法将多肽与KLH进行偶联获得免疫原-Pep-KLH，并将其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体，采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性，经ELISA检测表明抗血清和多克隆抗体可与Pep发生特异性免疫反应，经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别烟草叶片特异性条带，其相对分子量为70 kD，与预测分子量相符，表明利用该方法制备的EDS1多肽抗体具有较高特异性和灵敏度。
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| 关 键 词： | 抗虫棉 抗虫棉 核不育系 制种 栽培技术 回归模型 |
| 收稿时间： | 2011-07-14 |
| 修稿时间： | 2011-09-23 |
Preparation and Application of Polyclonal Antibody with a Peptide EDS1 |
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| Chen Zhuo , Liu Kaixing , Yu Dandan , Liu Jiaju , Wang Zhenchao , Li Xiangyang , Bi Liang , Hu Deyu , Yang Song , Song Bao'an. Preparation and Application of Polyclonal Antibody with a Peptide EDS1[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2011, 27(30): 164-170 |
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| Authors: | Chen Zhuo Liu Kaixing Yu Dandan Liu Jiaju Wang Zhenchao Li Xiangyang Bi Liang Hu Deyu Yang Song Song Bao'an |
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| Affiliation: | Chen Zhuo,Liu Kaixing,Yu Dandan,Liu Jiaju,Wang Zhenchao,Li Xiangyang,Bi Liang,H u Deyu,Yang Song,Song Bao'an(State Key Laboratory Breeding Base of Green Pesticide and Agricultural Bioengineering,Guiyang 550025) |
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| Abstract: | EDS1 is an important protein with regulation function at SA signal transduction pathway at plant host.In order to acquire polyclonal antibody of high titer and specificity against enhanced disease susceptibility 1(EDS1) ,according to the primary structure of information about EDS1 in NCBI GenBank,3 polypeptides with sequence-specific was obtained by using bioinformatics software contained Blastn,Blastx and Expasy.One polypeptide was synthetized by fmoc solid phase synthesis methods,and determined theirs pur... |
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| Keywords: | EDS1 sequence analysis polypeptide synthetizing polyclonal antibody |
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