基于牛结节性皮肤病病毒ORF61基因荧光定量检测方法的建立

基于国内流行的牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的基因组序列，建立了靶向ORF61基因的MGB探针荧光定量PCR检测方法。本研究基于LSDV基因序列设计出带有MGB探针的特异性荧光定量PCR引物，并进行特异性和灵敏性筛选验证。最终，筛选得到靶向于LSDV ORF61基因的一对qPCR引物；利用pCAGGS-ORF61真核表达质粒，获得标准曲线y=-3.287 5x+47.87,线性相关系数R²=0.998 6,扩增效率达101%;荧光定量PCR特异性、重复性和灵敏性试验结果表明，该引物的特异性高、重复性良好和灵敏度高等优点；该引物的最低检测限为6.71拷贝·μL^-1,各批次内与批次间重复性结果的变异系数均小于2%。以上结果表明，作者建立特异性LSDV的荧光定量PCR检测方法，为LSD预防和控制提供有效的检测手段。