MMP14调控骨骼肌卫星细胞分化的分子机制研究

旨在分析基质金属蛋白酶14(MMP14)调控骨骼肌卫星细胞分化的分子机制。本试验取10只4周龄C57/BL6雌性小鼠，利用胶原酶消化法分离骨骼肌卫星细胞。首先，对骨骼肌卫星细胞进行诱导分化，利用qRT-PCR和Western blot试验分析MMP14在骨骼肌卫星细胞增殖期和分化期表达量的变化。应用siRNA抑制MMP14蛋白表达，分为试验组(si-MMP14)和对照组(si-NC),每组3个重复：首先诱导细胞分化，应用免疫荧光和qRT-PCR分析试验组和对照组细胞分化水平的差异；随后取增殖期细胞进行蛋白组学测序，结合生物信息学分析鉴定差异蛋白，并筛选MMP14调控的关键差异蛋白和通路。本研究结果表明：1)MMP14在卫星细胞增殖期表达上调，在分化期表达下调；抑制MMP14蛋白会抑制肌管生成，表现为肌管融合指数下降。2)通过蛋白组学分析筛选到549个差异蛋白，其中有66个上调蛋白和483个下调蛋白，差异蛋白主要富集在细胞黏附、脂肪酸代谢以及AMPK通路等，参与调控细胞命运决定、组蛋白甲基化和染色质结构等生物学过程。3)通过蛋白互作关系网络分析发现MMP14与肌源性分化相关蛋白、脂肪生成...