| RSV编码的4种蛋白在“AcMNPV-sf9昆虫细胞”体系中的重组表达 |
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| 引用本文： | 林董,何柳,谢荔岩,吴祖建,林奇英,谢联辉.RSV编码的4种蛋白在“AcMNPV-sf9昆虫细胞”体系中的重组表达[J].福建农林大学学报(自然科学版),2008,37(3):269-274. |
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| 作者姓名： | 林董 何柳 谢荔岩 吴祖建 林奇英 谢联辉 |
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| 作者单位： | 1. 福建农林大学植物病毒研究所,福建,福州,350002;福建师范大学福清分校,福建,福清,350300
2. 福建农林大学植物病毒研究所,福建,福州,350002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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农业部农业公益性行业科研专项
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福建省教育厅科研项目 |
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| 摘 要： | 应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的4个基因NS2、NS3、CP和SP,并将它们克隆至pMD-18-T载体上.得到的重组质粒pMD-18-T-NS2、pMD-18-T-NS3、pMD-18-T-CP和pMD-18-T-SP经XbaⅠ/HindⅢ双酶切,分别与经相同方法酶切的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa california nuclear polyhedrosis virus,AcM-NPV)转移载体pFastBacHTb相连接,构建重组转移质粒pFastBacHTb-X(pFastBacHTb-NS2、pFastBacHTb-NS3、pFastBacHTb-CP和pFastBacHTb-SP).序列测定表明,目的基因准确地插入到表达载体中.重组质粒pFastBacHTb-X通过转化包含有穿梭载体的大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞DH10Bac,得到重组穿梭质粒rb-X(rb-NS2、rb-NS3、rb-CP和rb-SP).rb-X侵染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)离体细胞(sf9)24-72 h后,在荧光倒置显微镜可见光200倍视野下观察到细胞增大、培养液和细胞内出现颗粒状物质、部分细胞破裂甚至裂解等一系列与正常sf9细胞形态有明显区别的现象.rb-X侵染细胞72h后,从细胞提取蛋白,电泳分析得到4个条带,大小分别为28.2、29.2、40.2和25.2 ku,与预测的4种融合蛋白大小一致.Western blotting分析分别得到4条单一条带,证明了RSV NS2、NS3、CP和SP基因在"AcMNPV-sf9昆虫细胞"真核表达体系中成功表达.
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| 关 键 词： | 水稻条纹病毒 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 草地贪夜蛾细胞 杆状病毒表达系统 |
| 文章编号： | 1671-5470(2008)03-0269-06 |
| 修稿时间： | 2007年4月26日 |
Expression of four proteins encoded by Rice stripe virus (RSV) with "AcMNPV-sf9 insect cells" system |
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| LIN Dong,HE Liu,XIE Li-yan,WU Zu-jian,LIN Qi-ying,XIE Lian-hui.Expression of four proteins encoded by Rice stripe virus (RSV) with "AcMNPV-sf9 insect cells" system[J].Journal of Fujian Agricultural and Forestry University,2008,37(3):269-274. |
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| Authors: | LIN Dong HE Liu XIE Li-yan WU Zu-jian LIN Qi-ying XIE Lian-hui |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Rice stripe virus Autographa California nuclear polyhedrosis virus(AcMNPV) Spodoptera frugiperda(sf9) baculovirus expression system |
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