赤羽病ELISA检测方法的建立及试剂盒的研制

为了提高赤羽病的检测速度与效率，建立双抗夹心ELISA检测方法并进行试剂盒的研制。试验用纯化的AKV免疫BALB／c小鼠，细胞融合后用ELISA方法筛选出3株分泌抗AKV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞（1D1、1812和2G1），各杂交瘤细胞株均可以稳定地分泌特异性单克隆抗体，且其单克隆抗体亚型测定的结果均为IgG1、轻链均为k链。建立DAS--ELISA检测方法，确定抗AKV单克隆抗体1812株的最佳包被浓度为4μg／mL，多克隆抗体最佳稀释比为1：500，二抗最佳工作浓度为1：5000，阴性／阳性结果判定临界值为0．238，具有较好的特异性，检测极限为10^-4。表明该方法及试剂盒具有较强的实用价值。