| 一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因 |
| |
| 引用本文： | 刘美芹,沈昕,卢存福,尹伟伦.一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因[J].北京林业大学学报,2007,29(5):67-72. |
| |
| 作者姓名： | 刘美芹 沈昕 卢存福 尹伟伦 |
| |
| 作者单位： | 北京林业大学生物科学与技术学院;北京林业大学生物科学与技术学院;北京林业大学生物科学与技术学院;北京林业大学生物科学与技术学院 |
| |
| 摘 要： | 该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体，自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略．该策略中的所有操作步骤，包括poly (A)+mRNA的分离，cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的，操作简单易行．扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料（Driver）的cDNA第一链，直接扣除加有接头的处理材料（Tester）cDNA第二链中的共有序列．多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交，能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失．最后一轮扣除后的Tester二链中，含有大量差异表达序列，用Tester二链特有的接头引物进行扩增，能进一步提高扣除效率．该文选用此扣除方法，成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆，其中有4个克隆是全长cDNA序列．经序列分析发现，这些基因都与低温相关，进一步说明，该方法可用于克隆未知差异表达基因．
|
| 关 键 词： | 固相扣除杂交 聚合酶链式反应 低温诱导基因 |
| 文章编号： | 1000-1522（2007）05-0067-06 |
| 收稿时间： | 1900-01-01 |
| 修稿时间： | 2006-03-14 |
Direct cloning of differential expression genes with full-length by a modified solid subtractive hybridization |
| |
| LIU Mei-qin,SHEN Xin,LU Cun-fu,YIN Wei-lun.Direct cloning of differential expression genes with full-length by a modified solid subtractive hybridization[J].Journal of Beijing Forestry University,2007,29(5):67-72. |
| |
| Authors: | LIU Mei-qin SHEN Xin LU Cun-fu YIN Wei-lun |
| |
| Institution: | College of Biological Sciences and Biotechnology,Beijing Forestry University,100083,P.R.China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | solid subtractive hybridization polymerase chain reaction(PCR) cold_inducible genes |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《北京林业大学学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《北京林业大学学报》下载免费的PDF全文 |
