高GC含量青枯菌aac基因PCR扩增体系的建立与优化

通过添加增效剂、正交试验设计优化PCR反应体系、联合采用多种PCR程序等措施，建立并优化了PCR扩增体系，成功地从高GC青枯菌基因组中扩增出了长度为2 434 bp且GC含量高达70.9%的aac基因。PCR反应体系为20 μL包括5%DMSO、2.5 mmol/L MgCl2、500 μmol/L dNTP、10 pmol/L引物、1.25 U Taq酶、50 ng模板DNA。首先采用热启动PCR：95 ℃5 min，保持80 ℃，加入Taq酶；然后采用二步PCR：5个循环包括变性95 ℃1 min，65 ℃1 min；最后采用降落PCR：30个循环为95 ℃1 min，78 ℃1 min，每个循环降低0.5 ℃，72 ℃3 min；补充10个循环为95 ℃ 1 min，63 ℃1 min，72 ℃3 min；72 ℃10 min。该试验体系的建立与优化为研究高GC含量生物的基因功能提供了方法。