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oleosin-MT融合蛋白在拟南芥中的表达及鉴定
引用本文:官丽莉,陈 昱,朱 栋,等. oleosin-MT融合蛋白在拟南芥中的表达及鉴定[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2015, 43(10): 155-161
作者姓名:官丽莉  陈 昱  朱 栋  
作者单位:吉林农业大学 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,生命科学学院,吉林农业大学 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,生命科学学院,吉林农业大学 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,生命科学学院
基金项目:国家高技术研究发展计划(863)项目(2011AA100606);国家自然科学基金项目(31201237,31101172);吉林省科技厅中青年领军人才及优秀创新团队项目(20111815);教育部博士点基金青年教师基金项目(20122223120002);吉林省科技型中小企业创新基金项目(13C26212201223)
摘    要:【目的】获得转金属硫蛋白(MT)基因的拟南芥植株,为利用植物生物反应器规模化生产MT奠定基础。【方法】利用融合PCR方法,扩增拟南芥MT基因与油体蛋白oleosin基因的融合基因,将融合基因克隆至表达载体pOP上,构建重组质粒pOP-oleosin-MT。采用冻融法将质粒pOP-oleosin-MT转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化拟南芥,用PCR检测并筛选转基因拟南芥阳性植株,采用SDS-PAGE法检测oleosin-MT融合蛋白的表达,用邻苯三酚自氧化法和结晶紫法测定融合蛋白的体外抗氧化活性。【结果】成功构建了植物油体特异表达载体pOP-oleosin-MT,融合蛋白oleosin-MT在拟南芥种子中成功表达,其分子质量为26ku;总蛋白质量浓度达到50μg/μL时,超氧阴离子的清除率最高,为58.5%;总蛋白质量浓度为10μg/μL时,羟自由基清除率可达69.7%。【结论】成功获得转MT基因的拟南芥株系,并证明融合蛋白oleosin-MT在拟南芥中具有良好的体外抗氧化活性。

关 键 词:金属硫蛋白;拟南芥;油体蛋白;基因表达
收稿时间:2014-03-11

Expression and identification of oleosin-MT fusion protein in Arabidopsis
GUAN Li-li,CHEN Yu and ZHU Dong,et al. Expression and identification of oleosin-MT fusion protein in Arabidopsis[J]. Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition), 2015, 43(10): 155-161
Authors:GUAN Li-li  CHEN Yu  ZHU Dong  et al
Abstract:
Keywords:MT protein  Arabidopsis thaliana  oleosin protein  gene expression
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