| 磁珠富集法分离柿微卫星标记 |
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| 引用本文： | 阮小凤,Gabi Krczal,杨 勇.磁珠富集法分离柿微卫星标记[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2008,36(5):97-102. |
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| 作者姓名： | 阮小凤 Gabi Krczal 杨 勇 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学,园艺学院,陕西,杨凌,712100
2. 莱茵兰普法尔茨州植物研究所,67435,Neustadt/Weinstraβe,德国 |
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| 基金项目： | 科技部科技基础条件平台建设计划 |
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| 摘 要： | 【目的】分离柿属植物的微卫星标记,为柿种质资源的分类、进化等遗传研究奠定基础。【方法】提取磨盘柿(Diospyros kaki)基因组DNA后,用EcoRⅠ和MesⅠ2种内切酶酶切并连接接头,再用接头特异引物进行PCR扩增。扩增产物与生物素标记的(GA)15和(AC)15探针杂交,杂交复合物用链亲和素包裹磁珠进行结合,得到单链DNA目标片段,经PCR扩增,连接pGEM-T载体,转化入感受态大肠杆菌,得到微卫星富集小插入片段DNA文库。用Colony-PCR法筛选阳性克隆,进行测序分析。【结果】测序96个克隆,54个含微卫星序列,24个为有效微卫星序列,其中完美型(perfect)9个,占37.5%;非完美型(imperfect)7个,占29.2%;混合型(compound)8个,占33.3%(。GA)n重复最为常见。21条含微卫星序列已登录GenBank(Accession Number:EF567396~EF567416)。成功设计21对引物,经初步筛选,14对表现出多态性。【结论】试验方法分离柿基因组微卫星简便有效,得到的多态性引物可用于柿种质资源的遗传研究。
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| 关 键 词： | 柿 微卫星 磁珠富集 |
| 文章编号： | 1671-9387(2008)05-0097-06 |
| 修稿时间： | 2007年5月29日 |
Isolation of microsatellite in Diospyros kaki by magnetic beads |
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| RUAN Xiao-feng,Gabi Krczal,YANG Yong.Isolation of microsatellite in Diospyros kaki by magnetic beads[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2008,36(5):97-102. |
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| Authors: | RUAN Xiao-feng Gabi Krczal YANG Yong |
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| Institution: | 1(1 College of Horticulture,Northwest A & F University,Yangling,Shaanxi 712100,China;2 RLP AgroScience,AlPlanta,Institute for Plant Research,67435 Neustadt/Weinstraβe,Germany) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Diospyros kaki microsatellite magnetic beads enriched library |
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