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| 牛Nanog基因克隆及其在皮肤成纤维细胞中的表达 | |
| 引用本文： | 郑喜邦,云彦,胡勇策,李勇,王华岩,窦忠英. 牛Nanog基因克隆及其在皮肤成纤维细胞中的表达[J]. 畜牧兽医学报, 2008, 39(5): 547-554 |
| 作者姓名： | 郑喜邦 云彦 胡勇策 李勇 王华岩 窦忠英 |
| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学国家干细胞生物技术中心陕西分中心,杨凌,712100;广西大学动物科技学院,南宁,530005 2. 西北农林科技大学国家干细胞生物技术中心陕西分中心,杨凌,712100 3. 宁夏大学生命科学学院,银川,750021 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，教育部科学技术研究项目，陕西省推广计划 |
| 摘 要： | 本研究克隆了牛Nanog基因，构建其真核表达载体，并转染皮肤成纤维细胞，获得能够用作核移植供核细胞的稳定转染细胞株。从6周龄的胎牛原始生殖嵴中提取总RNA，通过RT—PCR扩增Nanog基因，将其克隆到pMD-18T载体，再从酶切鉴定和测序正确的质粒上切下目的片段，定向克隆到pCDNA3-FLAG表达载体上，挑选序列正确的真核表达质粒pCDNA3-Nanog转染牛皮肤成纤维细胞，获得了稳定转染的细胞株。用RT—PCR和Western Blotting分别检测NanogmRNA和FLAG-Nanog融合蛋白的表达，用免疫染色法验证该细胞株是否具有干细胞特征。结果表明：（1）从胎牛原始生殖嵴中克隆了序列正确的Nanog全长编码序列；（2）所构建的pFLAG-NanDg重组质粒能够在皮肤成纤维细胞中高效表达；（3）所获稳定转染的细胞株能表达Es细胞表面抗原SSEA-4和多能性维持因子Nanog、Oce-4，表明其具有一定的多能性。为进一步研究Nanog基因功能，尤其是探讨它在家畜早期胚胎发育、生产转基因动物，以及胚胎干细胞建系中的作用奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 牛 Nanog 分子克隆 真核表达 |
Cloning of Bovine Nanog Gene and Its Expression in Skin Fibroblast Cells |
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| ZHENG Xi-bang,YUN Yan,HU Yong-ce,LI Yong,WANG Hua-yan,DOU Zhong-ying. Cloning of Bovine Nanog Gene and Its Expression in Skin Fibroblast Cells[J]. Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences, 2008, 39(5): 547-554 | |
| Authors: | ZHENG Xi-bang YUN Yan HU Yong-ce LI Yong WANG Hua-yan DOU Zhong-ying |
| Abstract: | |
| Keywords: | Nanog |
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