Ⅰ型鸭肝炎病毒RNA聚合酶基因的克隆及原核表达 |
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作者姓名: | 王超 付玉志 张伟伟 陈宗艳 李传峰 杨宗伟 吴润 刘光清 |
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作者单位: | 1. 中国农业科学院上海兽医研究所,上海,200241 2. 甘肃农业大学动物医学院,兰州,730070 |
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基金项目: | 公益性农业科研专项,“863”计划,中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 |
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摘 要: | 根据Ⅰ型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ)ZJ-Ⅴ株基因组序列(GenBank登录号:EF382778),设计了一对扩增RNA聚合酶基因(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运用DNAStar软件对ZJ-Ⅴ株病毒与GenBank上已发表的其他不同DHV毒株的RdRp基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,结果表明,ZJ-Ⅴ株与A型DHV-ⅠR85952株(DQ226541)的同源性为97.1%,亲缘关系最近,与2株台湾新型(B型)DHV之间为76.9%和77.0%,与C-GY株和4株韩国新型(C型)DHV株之间为76.2%~76.5%,亲缘关系较远。将RdRp基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-RdRp,转化宿主菌E.coli BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示RdRp蛋白分子量约为65 kDa,Western blot检测证明RdRp蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的免疫学活性。本文为进一步研究DHV-Ⅰ的复制机理奠定了基础。
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关 键 词: | Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ) RNA聚合酶基因(RdRp) 原核表达 序列分析 |
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