| 以番鸭呼肠孤病毒σC表达蛋白为抗原的ELISA检测方法的建立 |
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| 作者姓名： | 耿宏伟 郭东春 张云 胡奇林 刘明 张序 王立群 |
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| 作者单位： | [1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001 [2]东北农业大学生命科学院,黑龙江哈尔滨150030 [3]福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350003 [4]哈尔滨市兽医卫生防疫站,黑龙江哈尔滨150001 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划（973）项目（2005CB522905） |
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| 摘 要： | 将鸭呼肠孤病毒小外壳dC蛋白编码基因克隆于原核表达栽体pET32a上，经EcoRⅠ和SacⅠ双酶切鉴定及序列分析，获得了重组质粒pET32a-σC，转化DH5a大肠埃希氏菌感受态细胞后，经SDS—PAGE和Western—blotting分析，融合蛋白能够与番鸭呼肠孤病毒感染康复鸭血清发生特异反应；以0．15mmol／L IPTG诱导，5h后融合蛋白σC表达量可达高峰，分子质量为50ku；融合蛋白纯化后被用作包被抗原，建立了检测鸭血清中呼肠孤病毒抗体的间接ELISA，经对检测条件优化，最佳包被浓度为5μg／mL，标准阳性血清的最适稀释倍数为1：40。用该方法对50份鸭血清样品进行了检测，与琼脂扩散抗体检测法相比，ELISA具有良好的特异性和敏感性。
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| 关 键 词： | 番鸭呼肠孤病毒 σC编码基因 原核表达 酶联免疫吸附试验 |
| 文章编号： | 1673-4696（2006）03-0171-06 |
| 收稿时间： | 2005-10-10 |
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