番茄WRKY转录因子基因片段的克隆及序列分析

【研究目的】本研究以番茄苗为实验材料，克隆出番茄WRKY转录因子的一个基因片段并对其核酸序列进行分析。【方法】根据本课题组已经克隆出的番茄特异的WRKY基因片段和番茄EST序列设计特异引物，利用RT-PCR技术获得番茄WRKY转录因子的一个基因片段并连接到pMD19-T载体中，转化DH5α，，筛选阳性克隆，用双酶切分析法对其进行鉴定并进一步对核酸序列进行测序分析。【结果】结果表明，克隆获得的WRKY转录因子基因片段约为680bp，用GenBank中的Blastn程序分析表明，其与CaWRKY（AY789641.1）、WIZZ（wizz mRNA）（AB028022.1）的相似性分别为86％和84％。【结论】WRKY转录因子在番茄中受JA诱导，这为克隆番茄WRKY基因全长，进而为番茄抗病育种奠定基础。