| 双抗夹心ELISA方法检测转cry8Ca基因烟草的杀虫蛋白 |
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| 作者姓名： | 王容燕 董建臻 王金耀 郎志宏 曹伟平 宋福平 杜立新 宋 健 冯书亮 |
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| 作者单位： | 王容燕,Wang Rongyan(河北农业大学,河北保定,071051;河北省农林科学院植物保护研究所,河北保定,071000);董建臻,Dong Jianzhen(河北农业大学,河北保定,071051);王金耀,曹伟平,杜立新,宋健,冯书亮,Wang Jinyao,Cao Weiping,Du Lixin,Song Jian,Feng Shuliang(河北省农林科学院植物保护研究所,河北保定,071000);郎志宏,宋福平,Lang Zhihong,Song Fuping(中国农业科学院植物保护研究所 |
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| 基金项目： | 国家转基因植物研究专项基金，河北省农林科学院青年基金? |
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| 摘 要： | 为了检测抗金龟子幼虫的转cry8Ca基因烟草杀虫蛋白的含量,对双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测体系中的反应条件进行了优化.采用方阵法对血清抗体的反应浓度进行筛选,对提取液、包被液、封闭液和底物作用时间进行比较和优选,结果确定多克隆抗体浓度为1:3200.酶标结合物浓度为1:400,pH 9.6碳酸缓冲液提取,pH7.4磷酸缓冲液包被,0.5%明胶.PBST封闭,TMB底物作用15 min为最佳双抗夹心ELISA检测条件.通过这一检测体系,对转cry8Ca基因烟草植株进行检测,S12株系的Cry8C蛋白含量最高,每克鲜重含有12.683～14.461 Pg,占总蛋白量的0.052%-0.062%.
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| 关 键 词： | 双抗夹心ELISA Cry8Ca蛋白 转基因烟草 金龟子幼虫 |
Detection of insecticidal protein in transgenic cry8Ca tobacco |
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| Authors: | Wang Rongyan Dong Jianzhen Wang Jinyao Lang Zhihong Cao Weiping Song Fuping
Du Lixin Song Jian Feng Shuliang |
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