两种早春短命植物CBF基因的原核表达分析

目的]在原核表达系统中高效表达真核生物中与抗寒相关的转录因子CBF基因,验证序列的正确性,摸索高效表达的条件,为后续转录因子的功能验证奠定基础.方法]以具有耐低温胁迫的两种早春短命植物绵果荠和卷果涩荠为材料,扩增两端有Nco Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的LlCBF和MsCBF基因的CDS全长,构建原核表达载体pET32a-LlCBF和pET32a-MsCBF,并将其转入Rosetta(DE3)菌株,进行了15、25、30和37℃下不同IPTG浓度的诱导表达;选择表达量最大时的温度及IPTG浓度进行不同时间的诱导表达;对高效表达条件下收集的菌体沉淀超声破碎,离心后同时收集上清和沉淀并进行煮沸处理,SDS-PAGE电泳检测融合蛋白可溶性.结果]LlCBF蛋白在30℃、IPTG浓度1 mmol/L、20h表达量达到最大,MsCBF蛋白在30℃、IPTG浓度2 mmol/L、20h达到最大表达量.结论]探索出了在原核表达系统中高效表达目的蛋白的最适条件,LlCBF蛋白和MsCBF蛋白表达形式均为包涵体.

The Prokaryotic Expression Analysis of CBF Genes in the two Early Spring Ephemeral Plants