| 盐穗木醛脱氢酶基因HcALDH7A1原核表达载体的构建及蛋白诱导表达与优化 |
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| 引用本文： | 黄世平,戴玲玲,宋策,曾幼玲.盐穗木醛脱氢酶基因HcALDH7A1原核表达载体的构建及蛋白诱导表达与优化[J].新疆农业科学,2015,52(8):1510. |
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| 作者姓名： | 黄世平 戴玲玲 宋策 曾幼玲 |
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| 作者单位： | 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐,830046 |
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| 摘 要： | 目的]为构建盐穗木盐响应基因HcALDH7A1的原核表达载体并进行外源基因的诱导表达和优化.方法]以实验室已构建好的p mD18-T Simple-HcALDH7A1/DH5α(Pst Ⅰ,SacⅠ)重组载体中盐穗木醛脱氢酶基因(HcALDH7A1)为模板,设计带有酶切位点(EcoRⅠ,XhoⅠ)的引物通过PCR扩增亚克隆到p mD18-TSimple vector中,测序鉴定正确后,通过EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切,构建重组的原核表达载体pET28a-HcALDH7 A1.将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白表达,并对其表达体系进行优化.结果]成功构建盐穗木醛脱氢酶基因HcALDH7A1的原核表达载体,诱导HcALDH7A1外源基因表达蛋白优化的最佳条件为IPTG终浓度为0.6 mmol/L,30℃诱导时间为4h.融合蛋白分子量大小为61 kD.结论]成功在大肠杆菌体内诱导表达盐穗木醛脱氢酶HcALDH7A1基因,并明确目的蛋白的最佳表达条件.为后续在原核表达系统大肠杆菌细胞中探索盐穗木HcALDH7A1的生物和非生物胁迫的功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 盐穗木 醛脱氢酶ALDH7A1 原核表达 |
| 收稿时间： | 2015-08-25 |
The Vector Construction and Prokaryotic Expression of Halostachys caspica Aldehyde Dehydrogenase Gene( Hc ALDH7A1) in E. coli |
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| HUANG Shi-ping,DAI Ling-ling,SONG Ce,ZENG You-ling.The Vector Construction and Prokaryotic Expression of Halostachys caspica Aldehyde Dehydrogenase Gene( Hc ALDH7A1) in E. coli[J].Xinjiang Agricultural Sciences,2015,52(8):1510. |
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| Authors: | HUANG Shi-ping DAI Ling-ling SONG Ce ZENG You-ling |
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