| 大肠杆菌植酸酶appA2基因联合人MxA基因真核表达载体的构建及表达研究 |
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| 引用本文： | 鞠辉明,白立景,牟玉莲,杨述林,刘宗平,李奎. 大肠杆菌植酸酶appA2基因联合人MxA基因真核表达载体的构建及表达研究[J]. 畜牧兽医学报, 2010, 41(12) |
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| 作者姓名： | 鞠辉明 白立景 牟玉莲 杨述林 刘宗平 李奎 |
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| 基金项目： | 国家转基因新品种培育重大专项，国家863计划，国家自然科学基金资助项目，扬州大学博士启动金费资助 |
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| 摘 要： | 本研究旨在探讨通过构建同时表达大肠杆菌植酸酶appA2及人抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)的真核表达载体,比较双基因表达载体和相应单基因表达载体中外源基因的表达效率;从pcDNA-ap-pA2载体上扩增CMV-appA2-BGHpA片段,通过MluI酶切位点连接到pcDNA-MxA载体中,构建重组载体pcDNA-appA-MxA(下称AMP),分别将pcDNA3.1(+)、pcDNA-MxA、pcDNA-appA2及AMP质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,取细胞通过实时荧光定量PCR测定细胞内appA2及MxA的表达,同时部分细胞通过Westernblot测定细胞内MxA蛋白表达量,采用改进的钼酸铵显色法测定细胞内植酸酶活性;酶切及测序结果表明成功构建了AMP载体;QRT-PCR结果表明,转AMP细胞组MxA表达水平是转pcDNA-MxA组的1.118倍,转AMP细胞组appA2表达水平是转pcDNA-appA2组的1.134倍,上述各组间差异显著(P0.05)。灰度分析结果表明,AMP细胞组细胞内MxA表达量是转染pcDNA-MxA细胞组的1.07倍;植酸酶活性测定试验结果表明,转AMP、pcDNA-appA2细胞组及对照组细胞内植酸酶酶活和对照组平均酶活分别为0.294、0.235及0.082FTU·μL-1,2个试验组间差异不显著,试验组和对照组间差异极显著(P0.01);试验结果表明本研究构建双基因表达载体中外源基因的表达效率比相应单基因表达载体表达效率高,本研究为以后多基因共表达及制备多基因转基因动物奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人抗黏液病毒基因A 植酸酶 appA2 真核表达载体 多顺反子 |
Construction and Expression Study of Escherichia coil Phytase (appA2) Combined with Human MxA Gene Eukaryotic Expression Vector |
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| JU Hui-ming,BAI Li-jing,MU Yu-lian,YANG Shu-lin,LIU Zong-ping,LI Kui. Construction and Expression Study of Escherichia coil Phytase (appA2) Combined with Human MxA Gene Eukaryotic Expression Vector[J]. Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences, 2010, 41(12) |
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| Authors: | JU Hui-ming BAI Li-jing MU Yu-lian YANG Shu-lin LIU Zong-ping LI Kui |
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