| 副溶血性弧菌vtrB基因敲除菌株的构建及其在抵抗胆汁中的作用 |
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| 引用本文： | 郜蓉,后来旺,赵勇,潘迎捷,孙晓红.副溶血性弧菌vtrB基因敲除菌株的构建及其在抵抗胆汁中的作用[J].上海海洋大学学报,2021,30(3):555-563. |
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| 作者姓名： | 郜蓉 后来旺 赵勇 潘迎捷 孙晓红 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学 食品学院, 上海 201306;上海海洋大学 食品学院, 上海 201306;农业农村部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室, 上海 201306;上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心, 上海 210306 |
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| 基金项目： | 上海市科技兴农重点攻关项目（2019-02-08-00-10-F01149）；上海市科学技术委员会平台能力建设项目（19DZ2284000） |
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| 摘 要： | 构建副溶血性弧菌转录调节因子VtrB （V.parahaemolyticus T3SS2 regulator B）敲除菌株和回补菌株，探讨VtrB在副溶血性弧菌抵抗胆汁中的作用。根据GenBank数据库中副溶血性弧菌vtrB基因上下游序列设计引物，通过融合PCR将vtrB基因上下游同源臂融合并克隆入自杀质粒pDS132中，将重组自杀质粒转入大肠杆菌S17-1 λpir中，再接合转移至副溶血性弧菌中进行同源重组，通过10%蔗糖筛选获得vtrB基因突变株ΔvtrB。将pBAD33-vtrB重组质粒电转入ΔvtrB突变株中获得回补菌株C-ΔvtrB。研究副溶血性弧菌野生型、突变株和回补株在2%脱氧胆酸盐（DOC）处理后的存活率。基于同源重组原理，经vtrB基因的PCR扩增和转录水平检测结果表明，成功获得副溶血性弧菌vtrB基因缺失突变株ΔvtrB和回补株C-ΔvtrB。与野生型和回补菌株C-ΔvtrB相比，ΔvtrB突变株在2% DOC处理20、40和60 min后的存活率分别为17%、4%和1%，vtrB基因的失活使得副溶血性弧菌对胆汁抵抗能力极显著降低（P<0.001），表现出存活能力的缺陷。由此表明，转录调节因子VtrB有助于副溶血性弧菌对胆汁的抵抗。
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| 关 键 词： | 副溶血性弧菌 vtrB基因 基因敲除 同源重组 胆汁抵抗 |
| 收稿时间： | 2020/4/17 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2020/6/9 0:00:00 |
Construction of vtrB gene knockout strain of Vibrio parahaemolyticus and its role in bile resistance |
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| GAO Rong,HOU Laiwang,ZHAO Yong,PAN Yingjie,SUN Xiaohong.Construction of vtrB gene knockout strain of Vibrio parahaemolyticus and its role in bile resistance[J].Journal of Shanghai Ocean University,2021,30(3):555-563. |
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| Authors: | GAO Rong HOU Laiwang ZHAO Yong PAN Yingjie SUN Xiaohong |
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| Institution: | College of Food Sciences and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;College of Food Sciences and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;Laboratory of Quality&Safety Risk Assessment for Aquatic Products on Storage and Preservation, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Shanghai 201306, China;Shanghai Engineering Research Center of Aquatic-Product Processing&Preservation, Shanghai 201306, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio parahaemolyticus vtrB gene gene knockout homologous recombination bile resistance |
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