| 转TLR4基因的绵羊胎儿成纤维细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 曹玉桃 李方舟 张全仓 顾美超 倪和民 刘云海 郭勇. 转TLR4基因的绵羊胎儿成纤维细胞系的建立[J]. 中国农学通报, 2013, 29(35): 63-68. DOI: 10.11924/j.issn.1000-6850.2013-1116 |
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| 作者姓名： | 曹玉桃 李方舟 张全仓 顾美超 倪和民 刘云海 郭勇 |
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| 作者单位： | 1. 北京农学院2. 北京农学院动物科学技术学院3. 北京农学院动物科学技术系4. |
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| 基金项目： | 2012年度国家科技重大专项“转基因生物新品种培育”一级子课题“抗病转基因羊扩繁体系初步建立”研究（2011ZX08008005-003）;北京市教委北京市属高等学校创新团队建设与教师职业发展计划项目“体细胞转基因克隆肉牛新品系培育与利用”（IDHT20130515）. |
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| 摘 要： | 为了通过脂质体介导的方法获得高效表达目的基因TLR4的绵羊胎儿成纤维细胞作为供体细胞，以便在胚胎移植前的体外筛选过程中，确定优越的转基因供体细胞，从而提高体细胞核移植生产抗病转基因绵羊的效率。本研究通过优化脂质体与质粒载体的比例浓度，进而再去转染原代培养的绵羊胎儿成纤维细胞，经G418筛选，以EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein )作为报告基因，从形态学与分子水平鉴定出已经稳定表达目的基因：Toll样受体4(Toll Like Receptor4，TLR4)基因的细胞系。最终经过筛选与纯化得到3个表达目的基因TLR4的细胞克隆，经RT-PCR与相对荧光定量PCR分析，在第二代转染的细胞中TLR4的表达最高，相对于未转染的绵羊胎儿成纤维细胞升高了9.65倍(P<0.01),并藉此为最终制备抗病转基因羊新品种，从提供稳定表达TLR4基因的转基因供体细胞系角度奠定基础。
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| 关 键 词： | 产量 产量 |
| 收稿时间： | 2013-04-17 |
| 修稿时间： | 2013-05-31 |
The Establishment of Fetal Sheep Fibroblasts Cell Line Transfected withVector Containing TLR4 Gene |
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| Cao Yutao,Li Fangzhou,Zhang Quancang,Gu Meichao,Ni Hemin,Liu Yunhai,Guo Yong. The Establishment of Fetal Sheep Fibroblasts Cell Line Transfected withVector Containing TLR4 Gene[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2013, 29(35): 63-68. DOI: 10.11924/j.issn.1000-6850.2013-1116 |
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| Authors: | Cao Yutao Li Fangzhou Zhang Quancang Gu Meichao Ni Hemin Liu Yunhai Guo Yong |
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| Affiliation: | (College of Animal Science and Technology, Beijing University of Agriculture, Beijing 102206) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | transgenic cloning |
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