‘红肉脐橙’八氢番茄红素合成酶基因的克隆与原核表达

【目的】克隆、分析‘红肉脐橙’（Citrus sinensis Osbeck cv. Cara Cara）八氢番茄红素合成酶（phytoene synthase，PSY）基因，并进行原核表达。【方法】以‘红肉脐橙’果实中分离的mRNA为模板，通过RT-PCR扩增到PSY cDNA片段，并分析其序列；利用PCR技术获得‘红肉脐橙’PSY cDNA的编码区全长，并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)，获得重组质粒pET-CitPSY转化大肠杆菌BL21（DE3）并诱导表达。【结果】‘红肉脐橙’PSY cDNA长1 520 bp，最大开放读码框为1 308 bp，可编码436个氨基酸，核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物PSY核酸、氨基酸序列之间的相似性分别在75%和70%以上，并且发现‘红肉脐橙’PSY的N末端存在转运肽信号序列，成熟的PSY包含1个跨膜结构域。原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白6×His-PSY，Western-blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应，分子量约为52 kD。【结论】该研究为进一步开展柑橘果实色泽分子改良奠定了基础。

Phytoene Synthase Gene Cloning from Citrus sinensis Osbeck cv.Cara Cara and Its Prokaryotic Expression